علم زراعة الأنسجة نبت 472 عملي

معمل نبت 472 - 2017 م
 

ت	إسم التجربة	المواد الكيميائية	الأدوات	الأجهزة
1	مقدمة عن زراعة الأنسجة -خطوات إنشاء  معمل زراعة الأنسجة	نظري	نظري
2	مكونات بيئات زراعة الأنسجة	نظري	نظري
3	تعقيم بيئات زراعة الأنسجة - تحضير بيئة زراعة الأنسجة معملياً : بيئة MS (Murashige & Skoog)	30 جرام سكروز - 8 جرام آجار نقي - 0.05 مليجرام أكسين NAA بودرة يذوب في قطرة أو قطرتين من  الأسيتون - 10 مليجرام من سيتوكينين Aminopurine بودرة تذوب في 1 مل من NaOH -  4.43 جرام من بيئة MS أو باكيت كامل منها - ليتر ماء مقطر	قطن - فلاسكات سعة 2 لتر - بيكر سعة 2 لتر - قصدير - ملعقة للوزن - ليبل - أطباق بتري أو أنابيب للزراعة بأغطية	جهاز الـ pH - جهاز الحركة الهزاز - ميزان - جهاز الأوتوكليف
4	تقنيات زراعة الأنسجة	200 مل من كحول الميثانول 70 % - كلوروكس 15% - 500 مل ماء مقطر ومعقم	نباتات حولية كالريحان والنعناع ودرنات البطاطس - ملاقط معقمة - 6 كؤوس زجاجية معقمة سعة 100 مل - 15 طبق بتري معقم - 20 حبة شاش معقمة - أنابيب بأغطية للزراعة - حامل للأنابيب	هود معقم - كابينة - أوتوكليف للتعقيم
5	تحضير بيئة مغذية لإنتاج الكلس	لتر ماء مقطر مرتين - 0.1 مليجرام من السيتوكاينين BA في قطرات من هيدروكسيد الصوديوم - أوكسين -2,3 بمقدار 50 مليجرام يذوب في 1 مل أسيتون لإستحثاث الكالوس - محاليل هيدروكسيد الصوديوم NaOH أو هيدروكسيد البوتاسيوم KOH و حمض الهيدروكلوريكHCL لتعديل حموضة أو قلوية الوسط الغذائي - كلوروكس 10% - كحول إيثانول 70 % - 30 جم سكر السكروز - 4 جم آجار نقي - 4.43 جم من بيئة MS أو باكيت كامل منها	قطن - فلاسكة سعة 1 لتر - فلاسكين سعة 500 مل - قصدير - ملعقة للوزن - ليبل - أنابيب للزراعة بأغطية معقمة - أطباق بتري معقمة للزراعة عدد 10	جهاز الـ pH meter - جهاز الحركة التقليب الهزاز - ميزان - جهاز الأوتوكليف
6	الإكثار الدقيق لإنتاج الكالوس	200 مل من كحول الميثانول 70% كلوروكس 15% - 500 مل ماء  مقطر ومعقم	أوراق نباتات حولية كالريحان ودرنات البطاطس وجزر صغير محتوي على شعيرات ملاقط معقمة - 6 كؤوس زجاجية معقمة سعة 100 مل - 15 طبق بتري معقمة - 20 حبة شاش معقمة - أنابيب بأغطية للزراعة سبق صب البيئات فيها - حامل للأنابيب - مشارط معقمة	هود معقم (كابينة) - أوتوكليف للتعقيم - أباجورة للإضاءة
7	زراعة المتوك - الهجن الأحادية	200 مل من كحول الميثانول 70% - كلوروكس 15% - 500 مل ماء مقطر ومعقم - بيئة صلبة سبق تحضيرها (الإكثار الدقيق المباشر) - بيئة سائلة سبق تحضيرها	برعم زهري يحتوي على أزهار مذكرة أو خنثى معاملة في درجات حرارة منخفضة وإضاءة منخفضة لمدة يومين - ملاقط معقمة - مشارط معقمة - 6 كؤوس زجاجية معقمة سعة  100 مل - 15 طبق بتري معقمة - 20 حبة شاشة معقمة -أنابيب بأغطية للزراعة  سبق صب البيئات فيها - بيئة الإكثار الدقيق بالطريقة المباشرة - بيئة سائلة لإنتاج الكالوس سبق تحضيرها - حامل للأنابيب	هود معقم (كابينة) - الجهاز الهزاز
8	إعداد بيئة التجذير	لتر ماء مقطر مرتين - 30 جم سكر  سكروز - 1 جم آجار نقي - 3 مليجرام أوكسين IBA بودرة تذوب في قطرة أو قطرتين من الأسيتون ويضاف له قطرات ماء مقطر للإذابة - 0.1 مليجرام من السيتوكاينين  Aminopurine بودرة تذوب في 1 مل من هيدروكسيد الصوديوم لإتمام الذوبان وإن لم تذب يضاف قطرات من ماء مقدر إضافة الأوكسين أكثر من السيتوكاينين لإستحثاث الجذور: 4.43 ملجم من بيئة MS أو باكيت كامل منها 200 مل من كحول الميثانول 70% - كلوروكس 15% - محاليل هيدروكسيد  الصوديوم NaOH أو هيدروكسيد البوتاسيوم  KOH وحمض الهيدروكلوريك HCl لتعديل حموضة أو قلوية الوسط الغذائي	قطن - فلاسكات سعة 2 لتر - بيكر سعة 2 لتر - ميزان - قصدير - ملعقة للوزن -  ليبل - أنابيب للزراعة بأغطية	جهاز الـ pH meter - جهاز الحركة التقليب (الهزاز) - جهاز الأوتوكليف
9	دمج البروتوبلاست	محلول التعقيم (0.1% من كلوريد الزئبق يذوب في 0.1 % من سلفات لدريل الصوديوم ) -  ماء مقطر ومعقم - إنزيمات هاضمة السليوليز  والهيموسليوليز والبكتينيز - سكر المانيتول مضاد حيوي - بيئة سائلة سبق تحضيرها للكلس	أوراق نبات البتونيا الخضراء  من 5-6 ورقات - كؤوس زجاجية معقمة عدد 6 - أطباق بتري معقمة - بيئة سائلة للإكثار الدقيق سبق تحضيرها - بيئة الإكثار الدقيق الصلبة سبق تحضيرها - مشارط معقمة - ملاقط معقمة - 6 أنابيب طرد مركزي	جهاز طرد مركزي -  جهاز الهزاز مضبوط على 25 درجة
10	الأقلمة	لتر ماء مقطر ومعقم - بيئة جاهزة من MS - مبيد فطري - سماد عضوي	دوارق بحجم 500 مل - رمل وبتموس - فيرمكيولايت شاش مترx متر أو قماش قطني واسع الفتحات ومعقم - أصص زراعية - بلاستيك مترx متر - بلاستيك ذو ثقوب مترx متر -  مصدر إضاءة جانبية
11	متابعة النتائج ومناقشتها
12	مراجعة